인산칼슘을 이용한 방법으로 생쥐 L(A9) 세포의 절반을 안정적으로 형질전환할 수 있을까?

상세 설명

연구진은 포유류 세포를 높은 효율로 형질전환하는 간단한 인산칼슘 형질감염 프로토콜과 neo 표지 벡터를 소개했다. 세포와 함께 배양하는 동안 인산칼슘-DNA 복합체가 배지에서 서서히 형성되어 세포 위에 침전된다.

효율적인 형질전환의 핵심 요인은 인산칼슘 침전에 쓰는 완충액의 pH(6.95), DNA를 세포와 함께 배양하는 동안의 CO2 농도(3%), 그리고 DNA의 양과 형태(20~30마이크로그램, 원형)였다. 원형 DNA와 뚜렷이 대조적으로 선형 DNA는 거의 활성이 없었다.

이 조건에서 생쥐 L(A9) 세포의 50%를 pcDneo로 안정적으로 형질전환할 수 있었다. pcDneo는 네오마이신 내성을 부여하는, 원숭이 바이러스 40 기반의 neo 표지 벡터다. NIH3T3, C127, CV1, BHK, CHO, HeLa 세포주는 이 벡터와 neo 표지가 포함된 pcD 벡터를 이용했을 때 10~50%의 효율로 형질전환됐다. 후자의 벡터는 cDNA 발현 라이브러리의 구축과 도입, 그리고 포유류 세포에서 복제된 cDNA의 발현에 사용됐다.