호르몬 수용체가 없는 유방암 세포에 수용체를 넣으면 호르몬이 성장을 돕게 될까요?

상세 설명

에스트로겐 수용체(ER) 양성 유방암 세포의 성장은 호르몬의 조절을 받습니다. 반면 초록은 대부분의 유방암이 ER 음성이며 호르몬 치료에 반응하지 않는다고 설명합니다.

연구진은 ER 음성 세포에서 복제에 대한 호르몬 조절을 회복할 수 있는지 알아보기 위해 ER 음성 MDA-MB-231 세포(클론 10A)에 센스 및 안티센스 구성적 ER 발현 벡터를 형질감염했습니다. 이 벡터에는 야생형 또는 돌연변이 ER 유전자가 네오마이신 내성 아미노글리코사이드 포스포트랜스퍼레이스 유전자(neo)와 연결되어 있었습니다.

생성된 형질감염 클론 10개 중 8개의 전체 RNA에 노던 블롯 분석을 실시해 ER과 neo를 암호화하는 메신저 RNA를 검출했습니다. 또한 돌연변이 ER 센스 형질감염 클론 1개와 야생형 ER 센스 형질감염 클론 2개에서 추출한 단백질에 웨스턴 블롯 분석을 실시해 ER의 분자량을 확인했습니다. ER 수준은 효소면역측정법과 리간드 결합법으로 각각 측정했습니다.

수용체가 기능하는지 확인하기 위해 연구진은 17 베타-에스트라디올(E2) 및/또는 항에스트로겐 ICI 164,384가 ER에 의해 활성화되는 유전자 조절, 프로게스테론 수용체 유도, DNA 복제, 세포주기 동태에 미치는 영향을 검사했습니다. 유전자 조절 검사에서는 에스트로겐 반응 요소가 클로람페니콜 아세틸전달효소(CAT) 유전자에 연결된 리포터 플라스미드로 세포를 두 번째로 일시적 형질감염했습니다.

ER과 neo를 암호화하는 메신저 RNA는 센스와 안티센스 클론 모두에서 검출됐습니다. 돌연변이와 야생형 센스 형질감염 세포 모두 ER 양성 대조 세포에서 발견된 것과 분자량이 비슷한 ER 단백질을 발현했습니다. 리간드 결합법에서는 야생형과 돌연변이 형질감염 세포 모두에서 높은 ER 수준이 검출됐지만, 효소면역측정법에서는 돌연변이 형질감염 세포의 수준이 더 낮게 검출됐습니다.

야생형과 돌연변이 센스 형질감염 세포의 ER은 모두 기능하는 것으로 보였습니다. E2가 이들 세포에서 리포터에 연결된 CAT와 프로게스테론 수용체의 발현을 촉진했기 때문입니다. E2는 야생형 센스 형질감염 세포에서는 10⁻¹⁰ M, 돌연변이 센스 형질감염 세포에서는 10⁻⁸ M 농도에서 DNA 복제를 억제했고, ICI 164,384는 이 효과를 차단했습니다.

연구진은 돌연변이 또는 야생형 ER 유전자로 안정적으로 형질감염된 ER 음성 유방암 세포가 호르몬 반응성을 되찾았지만, E2는 세포 성장을 촉진하지 않고 억제했다고 결론 내렸습니다. 또한 휴지 상태의 ER을 재활성화하는 것이 ER 음성 유방암을 제어하는 새로운 치료 접근법이 될 수 있다고 제안했습니다.